潔凈 實驗室要求：
1實驗室環境應清潔、衛生、安靜，實驗室內嚴禁吸煙和飲食。
2實驗人員必須穿戴工作衣帽，工作服經常洗滌、消毒、保持清潔。
3操作前后或離開實驗室必須用肥皂或消毒液洗手。
4發生菌液污染臺面或地面，應立即用3％甲醛或5％碳酸等消毒液由外向內傾覆其上，1小時后再擦拭，如為破傷風梭菌，則應隔夜后再擦洗。
5工作衣、帽、口罩受到菌液污染時，應立即脫下使污染部位包裹在內部，高壓滅菌后再清洗。
6如有傳染性培養物污染手部，應先用75％乙醇棉球擦拭，再浸入0.1%新潔爾滅消毒液內泡手，然后再用肥皂及清水徹底洗干凈。
7接種環（針），每次使用前后，必須通過火焰滅菌，冷卻后方可接種培養物，接種帶有蠟質、油質的培養物或菌苔殘留多時，不應立即在火焰上灼燒，應先在內焰里將油質培養物烘干后再移至火焰上滅菌，以免活菌外濺污染環境及感染操作者。
8帶菌的吸管應浸泡在5％甲酚消毒液內24h后取出清洗，帶菌的試管或培養物應在121℃高壓滅菌30分鐘后再取出清洗。
9在接種霉菌、放線菌時應在鋪有浸過消毒液的紗布上操作，防止孢子散落傳播。
10廢棄物的處理：

1. 必須消除生物危害后，才能處理，一般使用高壓蒸汽滅菌，也可以采用直接焚燒。
2. 污染性銳器（如一次性針頭）應滅菌后處理，注意避免銳器扎傷。
3. 污染性可重復使用的材料（如平皿）應滅菌后清洗，宜使用不易破碎的材料。
4. 工作服（含潔凈工作服）應定期清洗，懷疑污染的工作服應滅菌后清洗，潔凈工作服應滅菌后使用。

 無菌操作要求：
無菌操作是指在無菌的環境條件下，使用無菌器材，防止微生物污染的操作技術。即保持待檢樣品在操作時不被污染，又要防止被檢的微生物及陽性對照菌在操作中污染環境或感染操作人員。從事無菌及微生物操作的工作人員必須經過無菌技術及基礎微生物學專業知識的學習及培訓才具備上崗操作的資格，微生物專業檢驗人員也不應該頻繁地變換工作崗位。
1.無菌室應每次使用前后用0.1%苯扎溴銨溶液或2％甲醛液擦拭工作臺面及可能污染的死角，濕拖地面，打開無菌空氣過濾器及超凈工作臺的開關30分鐘，紫外線殺菌燈照射1小時。
2.操作人員用肥皂洗手后進入緩沖間換拖鞋，用75％乙醇棉球擦手，穿戴工作衣帽、口罩。將所需物品剝去牛皮紙及外包裝，從傳遞窗移入操作間，再用0.1%苯扎溴銨溶液泡手后進入操作間，在乙醇（或煤氣燈）火焰區（火焰高度3－5cm）操作。
3供試品表面消毒，如為安瓿先用砂輪劃痕后用2％碘酒棉球擦拭，再用75％乙醇棉球擦拭、待干，也可以用消毒液浸泡消毒。
4操作者勿用嘴直接吸吹吸管，防止致病菌感染操作人員及口中的雜菌污染供試品。
5在無菌操作中切勿大幅度或快速動作、拖行，以免攪動空氣中塵埃微粒。
6注射器如需回抽時，應對著火焰吸入無菌空氣。
7所用的器材如培養基、稀釋劑配制后經濕熱滅菌121℃30分鐘，吸管培養皿等均應洗滌，干燥，包扎后經干熱滅菌160℃2小時才能使用。

消毒劑的質量控制 

（一）消毒劑安全使用原則

1.正確選擇消毒劑的種類，盡可能選擇低毒、低殘留的消毒劑。

2.正確選擇使用濃度，確保消毒效果。

3.正確選擇消毒方式，可以浸泡、擦拭或噴霧。

4嚴格掌握消毒時間。

5.定期更換，避免產生耐藥性。

6.不聯用和混合使用。

7消毒前，應進行清潔。

（二）消毒劑的種類 

1.高效消毒劑（HLD）：能殺滅一切微生物（包括芽孢），常見的有過氧乙酸、甲醛、環氧乙烷和含氯消毒劑

2.中效消毒劑（ILD）：能殺滅抵抗力較強的結核桿菌和其他細菌、真菌和大多數病毒，常見的有乙醇、苯扎溴銨、碘酊和甲酚皂溶液等

3.低效消毒劑（LLD）：能殺滅除結核桿菌以外的抵抗力較弱的細菌以及抵抗力較弱的真菌（如念珠菌）和病毒（如流感病毒、艾滋病毒等），常見的有氯已定、三氯散和高錳酸鉀等

消毒劑配制

1.根據消毒劑使用區域和對象的不同，將消毒劑分成3類，分別是：

第一類消毒劑，專用于普通實驗區，僅用于物品外表面的消毒，常用的有聚維酮碘和石炭酸等；

第二類消毒劑，專用于潔凈室的更衣室，僅用于佩戴手套的雙手消毒，常用的有苯扎溴銨和75％乙醇；

第三類消毒劑，專用于無菌操作間，直接用于消毒直接接觸藥品的容器表面，也用于實驗操作過程中的手部消毒和實驗臺面消毒，常用的有聚維酮碘溶液和75％乙醇。

2.配制

第一類消毒劑的配制方法：不需使用無菌器具，可直接在普通實驗區按消毒劑使用說明書的配制方法，用純化水稀釋消毒劑的濃溶液后使用。

第二類消毒劑的配制方法：不需使用無菌器具，應在更衣室內按消毒劑使用說明書的配制方法，用純化水稀釋消毒劑的濃溶液后使用。

第三類消毒劑的配制方法：需要使用無菌器具并在無菌操作間內配制。首先取一次性集菌過濾器一個，將排液口放置在滅菌過的錐形瓶上，將消毒劑濃溶液通過薄膜過濾的方式除菌。然后，按比例取滅菌后的純化水，稀釋濃溶液，制成可供使用的消毒劑。將此消毒劑倒入放置有無菌脫脂棉球的消毒劑缸中，得到可直接使用的消毒劑棉球。（該類消毒劑制備后，應收集消毒劑中的微生物）

環境監控

（一）目的：

確定工作臺面、設備表面的消毒效果和消毒頻次，確定潔凈室的綜合性能以及進行維護的時機，確定培養箱的污染情況，判斷是否有必要進行徹底消毒。

（二）環境監控的對象

1.樣品貯存的環境

2.培養基制備的環境

3.樣品制備和檢驗的環境

4.培養的環境

（三）環境監控的方法

1.表面微生物數

• 擦拭法（棉拭子法）
• 淋洗法
• 影印盤法（RODAC法）

2.空氣微生物數

• 沉降菌法     浮游菌法

浮游菌數的測定：采用浮游菌測定儀。
沉降菌數測定：方法：無菌室及凈化工作臺面消毒擦拭后，打開層流凈化裝置及凈化工作臺開關30min，將營養瓊脂平板3個及玫瑰紅鈉瓊脂平板3個（直徑9cm），置凈化工作臺左、中、右各1個，開蓋暴露30min后將蓋蓋上，分別放在30－35℃培養箱內培養48h及25－28℃培養箱內培養72h，細菌和真菌平均菌落數小于等于1個為100級。實驗室一旦被污染，潔凈度達不到要求，可以清洗或更換凈化工作臺過濾器，用甲醛或丙二醇、乳酸熏蒸消毒，方法：在支架上放一個燒杯（內裝少許甲醛，8ml／平方米），下面放一個裝有少許乙醇的乙醇燈，點燃后，關閉門窗，乙醇用盡后燈自滅，甲醛蒸氣充滿無菌室，密閉24h。
缺點：甲醛蒸氣易銹蝕儀器，對人有刺激，可用氨水噴霧中和，減少對人眼的刺激。
 

環境監控的評價指標

1.表面微生物數

1.1需氧嗜溫菌小于5cfu/cm2，合格

1.2需氧嗜溫菌在5～25cfu/cm2之間，需進一步調查

1.3需氧嗜溫菌大于25cfu/cm2，不合格，應立即消毒處理

2.空氣微生物數

沉降菌大于15cfu/板，應暫停工作，進行消毒